深圳菲特立科科技針對市場的需求特推出德國**RVLM微生物快速檢測系統,可取代傳統微生物實驗室的快檢儀器.www.aa5x.com
微生物實驗室操作指導書目錄
（一）**守則
（二）檢驗總則
（三）基本技術要求
（四）食品平板菌落計數
（五）食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法
（六）沙門氏菌檢驗
（七）金黃色葡萄球菌檢驗
（八）霉菌計數
（九）革蘭氏染色
（十）空氣中微生物的檢驗
（十一） 水中微生物的檢驗
（十二）食品接觸面的微生物檢驗
（十三）蔬菜農殘的快速檢測
審核： 編制：
（一）**守則
1 進入實驗室工作衣、帽、鞋必須穿戴整齊。
2 在進行高壓、干燥、**等工作時，工作人員不得擅自離開現場，認真觀察溫度、時間，蒸餾易揮發、易燃液體時，不準直接加熱，應置水浴鍋上進行。
3 嚴禁用口直接吸取藥品和菌液，按無菌操作進行，如發生菌液、病原體濺出容器外時，應立即用有效**劑進行徹底**，**處理后方能離開現場。
4 工作完畢，兩手用清水肥皂洗凈，必要時可用（**劑）新潔爾滅、過氧乙酸液浸泡手，然后用水沖洗，工作服應經常清洗，保持整潔，必要時高壓**。
5 實驗完畢，及時清理現場和實驗用具，對染菌帶毒物品，進行****處理，并填寫日常工作記錄。
6 每日下班，認真檢查水、相關電源是否關閉和正在使用的設備運轉是否正常，并認真記錄。下班前關好門窗，方可離去。
（二）檢驗總則
1 主題內容與適用范圍
本文規定了微生物檢驗一般規則。
本文適用于食品中微生物學檢驗的采樣、檢驗及結果報告。
2 樣品的采集
2.1 采樣目的
確保采集的樣品能代表全部被檢驗的物質，使檢驗分析更具代表性。
2.2 采樣原則
2.2.1 采集的樣品要有代表性，采樣時應首先對該批食品原料、加工、運輸、貯藏方法條件、周圍環境衛生狀況等進行詳細調查，檢查是否有污染源存在，同時能反映全部被檢食品的組成、質量和衛生狀況。
2.2.2 應設法保持樣品原有微生物狀況，在進行檢驗前不得污染，不發生變化。
2.2.3 采樣必須遵循無菌操作程，容器必須**，避免環境中微生物污染，容器不得使用煤酚皂溶液，新潔爾滅、酒精等**物**，更不能含有此類**藥物，以避免殺掉樣品中的微生物，所用剪、刀、匙用具也需**方可使用。
2.3 采樣數量
取樣數量的確定，應考慮分析項目的要求、分析方法的要求及被檢物的均勻程度三個因素。樣品應一式三份，分別供檢驗、復檢及備查使用，每份樣品數量一般不少于200g。
根據不同種類采樣數量略有不同，實驗室檢驗樣品一般為25克。
2.4 采樣方法
2.4.1 采取隨機抽樣的方式。
2.4.2 直接食用的小包裝食品，盡可能取原包裝，直到檢驗前不要開封，以防污染。
2.4.3 如為非冷藏易腐食品，應迅速將所采樣品冷卻至0－4℃。
2.4.4 不要使樣品過度潮濕，以防食品中固有的細菌增殖。
2.4.5 在將冷凍食品送到實驗室前，要始終保持樣品處于冷凍狀態。樣品一旦融化，不可使其再凍，保持冷卻即可。
2.5 樣品的保存和運送
2.5.1 樣品采集完后，應迅速送往實驗室檢驗，送檢過程中一般不超過3h，如路程較遠，可保存在1－5℃環境中，如需冷凍者，則在冷凍狀態下送檢。
2.5.2 冷凍樣品應存放在－15℃以下冰箱內；冷卻和易腐食品應存放在0－5℃冰箱或冷卻庫內；其它食品可放在常溫冷暗處。
2.5.3 運送冷凍和易腐食品應在包裝容器內加適量的冷卻劑或冷凍劑。保證途中樣品不升溫或不融化。
2.5.4 待檢樣品存放時間一般不應超過36小時。
3 檢驗樣品的制備
3.1 樣品的全部制備過程均應遵循無菌操作程序。
3.2 檢驗冷凍樣品前應先使其融化。可在0－4℃融化，時間不超過18小時，也可在溫度不超過45℃的環境中融化，時間不超過15分鐘。
3.3 檢驗液體或半固體樣品前應先將其充分搖勻。如容器已裝滿，可迅速翻轉25次；如未裝滿，可于7s內以30cm的幅度搖動25次。從混樣到檢驗間隔時間不應超過3分鐘。
3.4 開啟樣品包裝前，先將表面擦干凈，然后用75％乙醇**開啟部位及其周圍。
3.5 非粘性液體樣品可用吸管吸取一定量，然后加入適量的稀釋液或培養基內，吸管插入樣品內的深度不應超過2.5cm,也不得將吸有樣品的吸管浸入稀釋液或培養基內。
3.6 粘性液體樣品可用**容器稱取一定量，然后加入適量的稀釋液或培養基。
3.7 固體或半固體樣品可用**的均質杯稱取一定量，再加適量的稀釋液或培養基進行均質，從樣品的均質到稀釋和接種，相隔時間不應超過15分鐘。
4 檢驗
4.1 實驗室收到樣品后，首先進行外觀檢驗，及時按照國家標準檢驗方法進行檢驗，檢驗過程中要認真、負責，嚴格進行無菌操作，避免環境中微生物污染。
4.2 檢驗所使用的稀釋液、試劑、培養基接觸的一切器皿必須經過有效的**。
4.3 實驗室所用儀器、設備的性能應定期檢查和校正。
4.4 制備試劑和培養基所用的水，應為無離子水或用玻璃器皿蒸餾的蒸餾水。
4.5 檢驗結束后，所有帶菌的培養基、試劑、稀釋液和器皿必須盡快**和洗刷。清洗過的器皿不應殘留洗滌劑的痕跡。
5 檢驗記錄和結果的報告
5.1 經檢驗的每份樣品都應有完整的檢驗記錄。樣品檢驗過程中所用方法、出現的現象和結果等均要用文字寫出試驗記錄，以作為對結果分析、判定的依據，記錄要求詳細、清楚、真實、客觀、不得涂改和偽造。
5.2 檢驗結束后，根據檢驗結果，及時填寫檢驗報告書，簽字并經負責人審核簽字后發出。
（三）基本技術要求
1 無菌操作要求
微生物實驗室工作人員，必須有嚴格的無菌觀念，許多實驗要求在無菌的條件下進行，主要原因，一是防止試驗操作中人為污染樣品，二是保證工作人員**，防止檢出的致病菌由于操作不當造成個人污染。要求如下：
1.1 接種細菌時必須穿工作服、帶工作帽；
1.2 進行接種食品樣品時，必須穿專用的工作服、帽及拖鞋，應放在無菌室緩沖間，工作前經紫外線**后使用；
1.3 接種食品樣品時，應在進無菌室前用肥皂洗手，然后用酒精棉球將手擦干凈；
1.4 進行接種所用的吸管、平皿及培養基等必須經****，打開包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應高壓**或用酒精點燃燒灼三次后使用；
1.5 從包裝中取出吸管時，吸管尖部不能觸及試管或平皿邊；
1.6 接種樣品、轉種細菌必須在酒精燈前操作，接種細菌活樣品時，吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要通過火焰**；
1.7 接種環和針在接種細菌前應經火焰燒灼全部金屬絲，必要時還要燒到針和環與桿的連接處，接種結核菌和烈性菌的接種環應在沸水中煮沸5min,再經火焰燒灼；
1.8 吸管吸取菌液或樣品時，應用相應的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。
2 無菌間使用要求
2.1 無菌間應密封，不得隨意打開，并設有與無菌間大小相應的緩沖間及門，另盡量設有的小窗，以備進入無菌間后傳遞物品。
2.2 無菌間應保持清潔，工作后用煤酚皂液溶液**，擦拭工作臺面，不得存放與試驗無關的物品。
2.3 無菌間使用前后應將門關緊，打開紫外燈，如采用室內懸掉紫外燈**時，需30W紫外燈，距離工作臺1m處，照射時間不少于30分鐘，使用紫外燈，應注意不得直接在紫外線下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精球輕輕擦拭，除去上面的灰塵和油垢，以減少紫外線穿透的影響。
2.4 處理和接種食品標本時，進入無菌間操作，不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過小窗傳遞。
2.5 在無菌間需用安裝空調時，則應有過濾裝置。
3 ****要求
微生物檢測用的玻璃器皿、金屬用具及培養基、被污染和接種的培養物等，必須經**后方能使用。
3.1 **前準備
3.1.1 所有需經**的物品首先要清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴密，如用金屬筒應將上面氣孔打開。
3.1.2 裝培養基的三角瓶塞好棉塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。
3.2 裝放
3.2.1 大型高壓蒸氣鍋：放置**物品不應超過鍋內容積的80%，物品應放置鍋內擱架上或鐵絲筐中。
3.2.2 手提式高壓鍋：將物品分別包扎好，直接放入**筒內，物品之間不能過擠。
3.3 設備檢查
3.3.1 檢查門的開關是否靈活，橡皮圈有無損壞，是否平整。
3.3.2 壓力表蒸氣排盡時是否停留在零位，關好門和蓋，通蒸氣或加熱后，觀察是否漏氣，壓力表與溫度計所標示的狀況是否吻合，管道有無堵塞。
3.3.3 對有自動電子程序控制裝置的**器，使用前應檢查規定的程序，是否符合于進行**處理的要求。
3.4 **處理
手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣**器的使用應按下列步驟進行：
3.4.1 手提式高壓鍋在主體內加入3L清水，立式高壓鍋加水16L（重復使用時應將水量補足，水變混濁需要更換）。
3.4.2 手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入**桶內壁的方管中（無軟管或軟管銹蝕破裂的**器不得使用）。
3.4.3 蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣；置**器于火源上加熱，立式壓力鍋通上電源，并打開頂蓋上的排氣閥放出冷氣（水沸騰后排氣10～15min）。
3.4.4 關閉排氣閥，使蒸氣壓上升到規定要求，并維持規定時間（按**物品性質與有關情況而定）。
3.4.5 達到規定時間后，對需干燥的物品，立即打開排氣閥排出蒸汽，待壓力恢復到零時，自然冷卻至60℃后開蓋取物，如為液體物品，不要打開排氣閥，而應立即將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢復至零，溫度降到60℃以下再打開蓋取物，以防止突然減壓液體劇烈沸騰活容器爆破。
3.5 **溫度與時間
3.5.1 壓力蒸氣**鍋**溫度與時間見下表：
| 物 品 | **時間，min |
| 115℃ | 121℃ |
| 不含糖等耐熱培養基 | | 15 |
| 含糖類等耐熱培養基 | 15～20 | |
| 染菌培養物 | | 30 |
| 器械器皿 | | 30 |
3.6 **處理：**后物品，按正常情況已屬無菌，從**器中取出應仔細檢查，以免再度污染。
3.6.1 物品取出，隨即檢查包裝的完整性，若有破壞或棉塞脫掉，不可作為無菌物品使用。
3.6.2 取出的物品，如為包裝有明顯的水浸者，不可作為無菌物品使用。
3.6.3 培養基或試劑等，應檢查是否符合達到**后的色澤或狀態，未達到者應廢棄。
3.6.4 取出的物品掉落在地或誤放不潔之處，或沾有水液，均視為受到污染，不可作為無菌物品使用。
3.6.5 取出的合格**物品，應存放于貯藏室或防塵柜內，嚴禁與未**物品混放。
3.6.6 凡屬合格物品，應標有**日期及有效期限。
3.6.7 每批**處理完成后，記錄**品名、數量、溫度、時間、操作者。
4 有毒有菌污物處理要求
微生物實驗室所用實驗器材、培養物等未經**處理，一律不得帶出實驗室。
4.1 經培養的污染材料及廢棄物應放在嚴密的容器或鐵絲筐內，并集中存放在指定地點，待統一進行高壓**。
4.2 經微生物污染的培養物，必須經121℃，30min高壓**。
4.3 染菌后的吸管，使用后放入5%煤酚皂溶液或石炭酸溶液中，*少浸泡24小時，再經121℃，30min高壓**。
4.4 涂片染色沖洗片的液體，一般可直接沖入下水道，染色的玻片放入5%煤酚皂液中浸泡24h后，煮沸洗滌。做凝集試驗用的玻片或平皿，必須經高壓**后洗滌。
4.5 打碎的培養物，立即用5%煤酚皂液或石炭酸噴灑和浸泡被污染部位，浸泡半小時后再擦拭干凈。
4.6 污染的工作服或進行烈性菌試驗所穿的工作服、帽、口罩等，應放入專用**袋內，經高壓**后方能洗滌。
5 玻璃器皿的清洗要求
5.1 目的
為了保證微生物實驗順利進行，保證實驗結果的準確性，不影響實驗進度，必須把器皿徹底清洗干凈。
5.2 注意事項
5.2.1 任何洗滌方法，都不應對玻璃器皿有所損傷，不能用有腐蝕作用的化學藥劑，也不能使用比玻璃器皿硬度大的物品來擦拭玻璃器皿。
5.2.2 一般新的玻璃器皿用2%的鹽酸液浸泡數小時，后用水沖洗干凈。
5.2.3 用過的器皿應立即洗滌，放置太久會增加洗滌困難。
5.2.4 強酸、強堿及其它氧化物和有揮發性的有毒物品，都不能倒在洗滌槽內，以免污染環境水質，必須倒在廢水缸中。
5.2.5 含有對人體有傳染性病菌的器具，應先煮沸**后再進行洗滌。
5.2.6 難洗滌的器皿不要與易洗滌的器皿放在一起，以免增加洗滌的麻煩。有油的器皿不要與無油的器皿混在一起，否則使本來無油的器皿沾上了油垢，浪費藥劑和時間。
5.3 洗滌劑的種類：水、洗衣粉、檸檬洗滌劑、肥皂
5.4 洗滌方法
5.4.1 含有瓊脂培養基的玻璃器皿的洗滌方法：事先應將器皿中的瓊脂刮去，然后用清水洗滌，并用試管刷刷其瓶壁，以除去粘污在壁上的灰塵和油垢。用洗衣粉水洗去油污，然后用自來水沖洗。洗好后的器皿應倒置晾干或置于干燥箱中干燥至無水滴。
5.4.2 載玻片及蓋玻片的洗滌法：新載玻片及蓋玻片先在20%的鹽酸溶液中浸一小時，然后用自來水沖洗2~3次，*后用蒸餾水換洗2~3次。用過的載玻片及蓋玻片，應用紙擦去油垢，再放在5%的洗衣粉水中煮30分鐘后立即用自來水沖洗，然后放在稀的洗液中浸泡2小時，再用自來水沖洗至中性。
5.4.3 移液管、倒管的洗滌方法：新的移液管及倒管先在的５％鹽酸溶液中浸一小時，然后用自來水沖洗幾次，*后用蒸餾水換洗幾次。用過的移液管、倒管先用自來水洗去表面的殘液，再放在洗衣粉水中浸泡一小時以上，再用自來水沖洗至管內壁無殘渣，*后用蒸餾水換洗次，晾干后入恒溫干燥箱中烘干。
6 培養基、無菌水的制備
6.1 基本原理
培養基的種類很多，不同微生物所需要的培養基不同。培養基制成后的物理狀態可分為液體、固體、半固體三種類型。目前所用培養基均為已配制好的生物試劑和紙片。
6.2 器材
三角瓶、試管、燒杯、玻棒、天平、搪瓷杯、量筒、鋁箔紙、角匙、杜氏小管、硅膠塞、電爐
6.3 培養基的種類
營養瓊脂培養基、乳糖膽鹽發酵培養基、乳糖發酵培養基、伊紅美蘭瓊脂培養基、馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基(附加**素)、平板計數瓊脂、月桂基硫酸鹽胰蛋白凍肉湯、煌綠乳糖膽鹽肉湯、EC肉湯、高鹽察氏瓊脂、三糖鐵瓊脂等
6.4 方法步驟
6.4.1 培養基的制備：
6.4.2 稱量：根據培養基的配方，稱取適量藥品于搪瓷杯中；
6.4.3 溶解：用量筒量取所需水量，置電爐上加熱，一邊攪拌，至完全溶解，加熱至沸騰，拔掉電源，待冷卻；
6.4.4 分裝：根據不同需要，立即趁熱分裝入三角瓶或試管中，分裝三角瓶以不超過三角瓶一半為宜，分裝試管一般為管長的1/5（需根據試管的大小而定）。液體培養基如乳糖膽鹽發酵培養基約分裝10毫升左右。
6.4.5 塞硅膠塞：裝好培養基的試管應塞上硅膠塞，松緊合適，緊貼管壁，不留縫隙，約1/2塞入內，這樣即可過濾空氣，避免雜菌侵入，又可減緩培養基水分的蒸發。
6.4.6 包裝：三角瓶棉塞頭部應用錫箔紙包扎，試管集中于試管簍。
6.5 無菌水的制備：
6.5.1 用10ml移液管量取9.2ml蒸餾水（稀釋水）裝入試管中。
6.5.2 用100ml量筒量取95ml蒸餾水（稀釋水）裝入150ml的三角瓶中。可置少許玻璃珠于三角瓶內，防止暴沸。
6.5.3 量取240ml蒸餾水（稀釋水）于250ml的三角瓶中，塞上瓶塞用牛皮紙包扎好，高壓**備用。
7 設備使用原則
7.1 實驗設備的使用由實驗員嚴格按照操作說明書進行，其他人員不得隨意操作。
7.2 實驗設備的日常維護保養由實驗員根據設備操作說明書進行，出現不可排除的故障時，經部門總經理批準，商請專業人員維修。
7.3 實驗設備應定期進行計量檢測，確保儀器的準確性。
7.4 實驗員應愛護儀器設備，使用前應檢查，使用后應及時清理清潔，并定期維護保養，下班前應檢查設備電源是否關閉。
（四）食品平板菌落計數
1 主題內容與適用范圍
本文規定了食品平板菌落計數的方法。
本文適用于航空配餐的各種半成品、成品及原料，有專門規定的檢驗方法的除外。
2 設備和材料
超凈工作臺、恒溫培養箱（36±1℃）、均質器、振蕩器、吸管（1ml、10ml）、平皿、稀釋瓶、天平等
3 培養基和試劑
平板計數瓊脂、75％乙醇、磷酸鹽緩沖稀釋液
4 操作程序
4.1 樣品制備
4.1.1 以無菌操作取有代表性的樣品盛于**容器內。如有包裝，則用75％乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。
4.1.2 制備樣品勻液
以無菌操作取25g樣品，放入裝有225ml稀釋劑的**均質杯內，于8000r/min均質1-2min，制成1：10的樣品勻液。如樣品均質時間超過2min，應在均質杯外加冰水冷卻。
4.2 稀釋樣品勻液
4.2.1 用10ml**吸管準確吸取1：10的樣品勻液10ml，放入裝有90ml稀釋劑的150ml 稀釋瓶中。迅速振搖，將樣品混勻，制成1：100的樣品勻液。振搖時，幅度為30cm，7s內振搖25次。從容器中吸取樣品勻液和以后的稀釋操作中，吸管尖不要碰著瓶口。吸入的液體應先高于所要求的刻度，然后提起吸管使其**離開液面并貼在容器內壁將液體調至所要求的刻度。
4.3 平板接種
4.3.1 對于每個樣品，選用合適的三個連續稀釋度的樣品液進行平板計數。
4.3.2 分別用**吸管吸取1ml樣品液放入作了適宜標志的平皿內。每個稀釋度的樣品液用兩個平皿。
4.3.3 分別加12-15ml平板計數瓊脂（約45℃左右）到平皿內。立即將平皿內的樣品液和瓊脂培養基充分混合。要防止把混合物濺到平皿壁和蓋上。同時將平板計數瓊脂傾入加有1ml稀釋劑的另一**平皿作空白對照。將樣品液加入平皿后應立即傾注瓊脂培養基，每個樣品從開始稀釋到傾注*后一個平皿所用的時間不得超過20min。
4.4 培養
待瓊脂凝固后將平皿翻轉，立即放進36±1℃的恒溫培養箱培養48±2h。培養箱應保持一定的濕度，經48h培養的瓊脂培養基的失重不得超過15％。
4.5 菌落計數和記錄
4.5.1 培養后，立即計數每個平板上的菌落數。25-250個菌落為合適范圍。如不能立即計數，應將平板存放于0-4℃，但不得超過24h。
4.5.2 操作者對同一平板復核自己的計數結果，其差異應在5％之內，而其他人對這一平板重復計數，其差異應在10％這內。否則，應找出原因，加以校正。
4.6 計算和記錄數字
適宜稀釋度的兩個平板的菌落數平均值或兩個稀釋度的平板菌落數平均值乘以相應稀釋度倍數計算出每克（毫升）樣品中平板菌落數。
記錄時，只有在換算到每克（毫升）樣品中平板菌落數時，才能定下兩位有效數字，第三位數字采用四舍五入的方法記錄。也可將樣品的平板菌落數記錄為10的指數形式。
5 結果報告
報告每克（毫升）樣品中平板菌落數或估計的平板菌落數。
注：本文參照SN0168-92《出口食品平板計數》
（五）食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法
1 主題內容與適用范圍
本文規定了食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法。
本文適用于航空食品的檢驗。
2 設備和材料
吸管（1ml、10ml）、恒溫培養箱（36±1℃、44.5±0.5℃）、冰箱、均質器、振蕩器、平皿、稀釋瓶、天平、顯微鏡等
3 培養基和試劑
月桂基硫酸鹽胰蛋白月示（LST）肉湯、煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯、EC肉湯、伊紅美藍瓊脂（EMB）、營養瓊脂斜面、色氨酸肉湯、MR-PV培養基、Korser氏枸掾酸鹽肉湯、結晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）、Butterfield氏磷酸鹽緩沖稀釋液、生理鹽水、革蘭氏染色液、Kovacs氏靛基質試劑、甲基紅指示劑、Voges-pros kauer（V-P）試劑、
4 樣品制備
4.1 以無菌操作取有代表性的樣品盛于**容器內。如有包裝，則用75％乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。
4.2 制備樣品勻液
以無菌操作取25g樣品，放入裝有225ml稀釋劑的**均質杯內，于8000r/min均質1-2min，制成1：10的樣品勻液。如樣品均質時間超過2min，應在均質杯外加冰水冷卻。
4.3 稀釋樣品勻液
用10ml**吸管準確吸取1：10的樣品勻液10ml，放入裝有90ml稀釋劑的150ml 稀釋瓶中。迅速振搖，將樣品混勻，制成1：100的樣品勻液。
5 大腸菌群的測定
5.1 大腸菌群MPN值的測定
5.1.1 對每個樣品，選擇適宜的三個連續稀釋度的樣品稀釋液。每個稀釋度接種三管月桂基硫酸鹽胰蛋白月示（LST）肉湯，每管接種1ml。
5.1.2 將接種管置于36±1℃的培養48±2h。
5.1.3 觀察試管的產氣情況：檢查倒管內是否有氣泡產生，記錄在24h和48h內產氣的LST肉湯管數。如所有LST肉湯管均未產氣，則可報告為大腸菌群陰性；如有產氣者，則進一步作證實試驗。
5.2 大腸菌群的證實試驗
5.2.1 將所有產氣管用直徑為3mm的接種環移種到煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯管中。
5.2.2 置BGLB肉湯管于36±1℃的培養48±2h。
5.2.3 記錄所有BGLB肉湯管的產氣管數。
5.2.4 結果報告：按BGLB肉湯產氣管數，查MPN表報告每克（毫升）樣品中大腸菌群的MPN值。
6 糞大腸菌群測定
6.1 用接種環將所有48±2h內產氣的LST肉湯管培養物移種于EC肉湯管中。
6.2 將所有接種的EC肉湯管在30min內放入44.5±0.5℃水浴箱內，培養24±2h。水浴箱的水平面應高于肉湯培養基液面。應以已知為44.5℃產氣陽性的大腸桿菌和44.5℃不產氣的產氣腸桿菌或其他大腸菌群細菌作陽性和陰性對照。
6.3 記錄EC肉湯管的產氣情況。產氣管為糞大腸菌群試驗陽性；不產氣管為糞大腸菌群試驗陰性。
6.4 結果報告：按產氣管數，查MPN表報告每克（毫升）樣品中糞大腸菌群的MPN值。
7 大腸桿菌測定
7.1 將6.3條中的EC肉湯管繼續培養24h取其產氣管的培養物劃線接種于伊紅美藍（EMB）平板，36±1℃的培養24±2h。
7.2 檢查平板上有無具黑色中心有光澤或無光澤的典型菌落。
7.3 如有典型菌落，則從每個平板上至少挑取2個典型菌落；如無典型菌落，則從每個平板上至少挑取2個可疑菌落。用接種針接觸菌落中心部位，移種到營養瓊脂斜面上，36±1℃的培養18-24h。
7.4 將斜面培養物移種到下列培養基進行生化試驗。
7.4.1 色氨酸肉湯：在36±1℃的培養24±2h后，加Kovacs氏試劑0.2-0.3ml，上層出現紅色為靛基質陽性反應。
7.4.2 MR-VP培養基：在36±1℃的培養48±2h后。以無菌操作移取培養物1ml至13mm*100mm試管中，加5％α-萘酚乙醇溶液0.6ml，40％氫氧化鉀溶液0.2ml和少許肌酸結晶，振搖試管后靜置2h，如出現伊紅色，為VP試驗陽性。
將 MR-VP培養物的剩余部分再培養48h滴加5滴甲基紅溶液。如培養物變紅色，為甲基紅試驗陽性，若變黃色則為陰性反應。
7.4.3 Korser氏枸掾酸鹽肉湯：于36±1℃的培養96h記錄有無生長。
7.4.4 LST肉湯：于36±1℃的培養48±2h，觀察試管中是否產氣。
7.4.5 革蘭氏染色：取18h營養瓊脂斜面培養物作革蘭氏染色。大腸桿菌為革蘭氏陰性。
7.4.6 大腸桿菌與非大腸桿菌生化鑒別如下
| 靛基質 | MR | VP | 枸掾酸鹽 | 鑒定（型別） |
| + - | + + | - - | - - | 典型大腸桿菌 非典型大腸桿菌 |
| + - | + + | - - | + + | 典型中間型 非典型中間型 |
| - + | - - | + + | + + | 典型產氣腸桿菌 非典型產氣腸桿菌 |
如出現上表以外的生化反應類型，表明培養物可能不純，應重新劃線分離，必要時做重復試驗。
7.5 結果報告：大腸桿菌為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，發酵乳糖產酸產氣，IMViC試驗為++--或-+--，再根據LST肉湯陽性管數查MPN表，報告每克（毫升）樣品中大腸桿菌MPN值。
注：本文參照SN0169-92《出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法》
（六）沙門氏菌檢驗
1 主題內容與適用范圍
本文規定了食品中沙門氏菌的檢驗方法。
本文適用于航空食品的檢驗。
2 設備和材料
吸管（1ml、10ml）、恒溫培養箱（36±1℃、42℃）、冰箱、均質器、振蕩器、平皿、稀釋瓶、天平、顯微鏡、接種棒等
3 培養基和試劑
緩沖蛋白胨水（BP）、氯化鎂孔雀綠增菌液、四硫酸鈉煌綠(TTB)增菌液、亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液、亞硫酸鉍瓊脂(BS)、DHL瓊脂、HE瓊脂、WS瓊脂、SS瓊脂、三糖鐵瓊脂、蛋白胨水、靛基質試劑、尿素瓊脂(pH7.2)、***(KCN)培養基、氨基酸脫羧酶試驗培養基、糖發酵管、ONPG培養基、半固體瓊脂、丙二酸鈉培養基、沙門氏菌因子血清：按26種用于初步分型；57種用于進一步分型；163種用于詳細分型。
4 檢驗程序
沙門氏菌檢驗程序如下：
36±1℃ 4h
42℃ 18-24h 36±1℃ 18-24h
36±1℃ 40-48h 36±1℃ 18-24h
TSI（斜面、底層、產氣、H2S），蛋白胨水（），尿素（PH7.2），KCN, 賴氨酸 |
H2S - 靛基質-尿素- KCN- 賴氨酸+/- |
5 操作步驟
5.1 前增菌
取檢樣25g，加入225mL緩沖蛋白胨水于均質杯內。用均質器以8000～10000r/min打碎1min，于36±1℃培養4h(干蛋品培養18～24h)，移取10mL，轉種于100mL氯化鎂孔雀綠增菌液（MM）或四硫酸鈉煌綠（TTB）增菌液內，于42℃培養18～24h。同時，另取10mL，轉種于100mL亞硒酸鹽骯氨酸（SC）增菌液內，于36±1℃培養18～24h。
5.2 分離
取增菌液1環，劃線接種于一個亞硫酸鉍瓊脂平板和一個DHL瓊脂平板。兩種增菌液可同時劃線接種在同一個平板上。于36±1℃分別培養18～24h(DHL)或40～48h(BS)，觀察各個平板上生長的菌落，沙門氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和沙門氏菌Ⅲ在各個平板上的菌落特征見表1。
表1 沙門氏菌屬各群在各種選擇性瓊脂平板上的菌落特征
| 選擇性瓊脂平板 | 沙門氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ | 沙門氏菌Ⅲ（即亞利桑那菌） |
| BS瓊脂 | 產硫化氫菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周圍培養基可呈黑色或棕色；有些菌株不產硫化氫，形成灰綠色的菌落周圍培養基不變 | 黑色有金屬光澤 |
| DHL瓊脂 | 無色半透明；產硫化氫菌落中心帶黑色或幾乎全黑色 | 乳糖遲緩陽性或陰性的菌株與沙門氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ相同；乳糖陽性的菌株為粉紅色，中心帶黑色 |
5.3 生化試驗
5.3.1 自選擇性瓊脂平板上直接挑取數個可疑菌落，分別接種三糖鐵瓊脂。在三糖鐵瓊脂內，腸桿菌科常見屬種的反應結果見表2。
表2 腸桿菌科各屬在三糖鐵瓊脂內的反應結果
| 斜面 | 底層 | 產氣 | 硫化氫 | 可能的菌屬和種 |
| - | + | +/- | + | 沙門氏菌屬、弗勞地氏檸檬酸桿菌、變形桿菌屬、緩慢愛德華氏菌 |
| + | + | +/- | + | 沙門氏菌Ⅲ、弗勞地氏檸檬酸桿菌、普通變形桿菌 |
| - | + | + | - | 沙門氏菌屬、大腸埃希氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌、普羅菲登斯菌屬 |
| - | + | - | - | 傷寒沙門氏菌、雞沙門氏菌、志賀氏菌屬、大腸埃希氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌、普羅菲登斯菌屬 |
| + | + | +/- | - | 大腸埃希氏菌、腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬、沙雷氏菌屬、弗勞地氏檸檬酸桿菌 |
說明：在三糖鐵瓊脂內只有斜面產酸并同時硫化氫(H2S)陰性的菌株可以排除，其他的反應結果均有沙門氏菌的可能，同時也均有不是沙門氏菌的可能。
5.3.2 在接種三糖鐵瓊脂的同時，再接種蛋白陳水(供做靛基質試驗)、尿素瓊脂(pH7.2)、***(KCN)培養基和賴氨酸脫竣酶試驗培養基及對照培養基各1管，于36±1℃培養18～24h，必要時可延長至48h，按表3判定結果。按反應序號分類，沙門氏菌屬的結果應屬于A1、A2和B1，其他5種反應結果均可以排除。
表3 腸桿菌科各屬生化反應初步鑒別表
| 反應序號 | 硫化氫 | 靛基質 | 尿素 | *** | 賴氨酸 | 判定菌屬 |
| A1 | + | - | - | - | + | 沙門氏菌屬 |
| A2 | + | + | - | - | + | 沙門氏菌屬（少見）緩慢愛德華氏菌 |
| A3 | + | - | + | + | - | 弗勞地氏檸檬酸桿菌、奇異變形桿菌 |
| A4 | + | + | + | + | - | 普通變形桿菌 |
| B1 | - - | - - | - - | - - | + - | 沙門氏菌屬、大腸埃希氏菌、甲型傷寒沙門氏菌、雞沙門氏菌、志賀氏菌屬 |
| B2 | - - | + + | - - | - - | + - | 大腸埃希氏菌、志賀氏菌屬 |
| B3 | - - | - - | +/- + | + + | + - | 克雷伯氏菌族各屬陰溝腸桿菌、弗勞地氏檸檬酸桿菌 |
| B4 | - | + | +/- | + | - | 摩根氏菌、普羅菲登斯菌屬 |
5.3.3 反應序號A1：典型反應判定為沙門氏菌屬。如尿素、KCN和賴氨酸3項中有1項異常，按表4可判定為沙門氏菌。如有2項異常，則按A3判定為弗勞地氏檸檬酸桿菌。
表4
| 尿素 | *** | 賴氨酸 | 判定結果 |
| - - + | - + - | - + + | 甲型副傷寒沙門氏菌（要求血清學鑒定結果） 沙門氏菌Ⅳ或Ⅴ（要求符合本群生化特性） 沙門氏菌個別變體（要求血清學鑒定結果） |
5.3.4 反應序號A2：補做甘露醇和山梨醇試驗，按表5判定結果。
表5
| 甘露醇 | 山梨醇 | 判定結果 |
| + - | + - | 沙門氏菌靛基質陽性變體（要求血清學鑒定結果） 緩慢愛德華氏菌 |
5.3.5 反應序號B1：補做ONPG。ONPG十為大腸埃希氏菌，ONPG－為沙門氏菌。同時，沙門氏菌應為賴氨酸＋，但甲型副傷寒沙門氏菌為賴氨酸－。
5.3.6 必要時按表6進行沙門氏菌生化群的鑒別。
表6沙門氏菌屬各生化群的鑒別
| 項目 | Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ | Ⅳ | Ⅴ | Ⅵ |
| 衛矛醇 山梨醇 水楊苷 ONPG 丙二酸鹽 KCN | + + - - - - | + + - - + - | - + - + + - | - + + - - + | + + - + - + | - - - - - - |
5.4 血清學分型鑒定
具體內容見GB/T4789.4-2003《食品衛生微生物學檢驗沙門氏菌檢驗》中6.4。
5.5 菌型的判定和結果報告
綜合以上生化試驗和血清學分型鑒定的結果，按照GB/T4789.4-2003《食品衛生微生物學檢驗沙門氏菌檢驗》中表8或有關沙門氏菌屬抗原表判定菌型，并報告結果。
注：本文參照GB/T4789.4-2003《食品衛生微生物學檢驗沙門氏菌檢驗》
（七）金黃色葡萄球菌檢驗
1 主題內容與適用范圍
本文規定了食品中金黃色葡萄球菌的檢驗方法。
本文適用于航空食品的檢驗。
2 設備和材料
吸管（1ml、10ml）、恒溫培養箱（36±1℃）、冰箱、均質器、振蕩器、平皿、稀釋瓶、天平、顯微鏡、接種棒等
3 培養基和試劑
普通肉湯培養基、胰蛋白胨大豆肉湯、Baird－Prker瓊脂平板、緩沖蛋白胨水（BP）、凝固酶試驗凍干血漿
4 檢驗程序（非選擇性增菌法）
金黃色葡萄球菌檢驗程序如下：
36±1℃ 2h
36±1℃ 24h
36±1℃ 48h
36±1℃ 24h
5 操作步驟
5.1 稱取25g固體樣品；吸取25mL液體樣品，加入225mLBP胨水，固體樣品研磨或置均質器中制成混懸液。
5.2 吸取10mL上述混懸液，接種于10mL雙料胰蛋白胨大豆肉湯中，置36±1℃培養2h。
5.3 再加入20ml 含20％NaCl的單料胰蛋白胨大豆肉湯，置36±1℃培養24±2h。
5.4 劃線轉種2個表面干燥的Baird－Parker瓊脂平板上，36±1℃培養46±2h。
5.5 挑取可疑菌落移種到肉湯培養基中，置36±1℃溫箱培養24h。
5.6 取肉湯培養物0.3ml同0.5ml凝固酶試驗凍干血漿于8mm*100mm試管內充分混合，置36±1℃培養，定時觀察是否有凝塊形成，至少觀察6h，以內容物完全凝固，使試管倒置或傾斜時不流動為陽性。試驗中需同時做已知陽性和陰性對照。對可疑結果，應進行革蘭氏染色、鏡檢和其他輔助試驗。
5.7 本菌為革蘭氏陽性球菌，排列是葡萄球狀，無芽胞，無莢膜，致病性葡萄球菌菌體較小，直徑約為0.5～1μm。在Baird－Parker平板上為圓形、光滑凸起、濕潤、直徑為2～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的硬度，偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落；但無混濁帶及透明圈。
5.8 報告結果
如發現有凝固酶試驗陽性的菌落，即報告1g(ml)食品中有金黃色葡萄球菌存在，否則為陰性。
注：本文參照SN0172-92《出口食品中金黃色葡萄球菌檢驗方法》
（八）霉菌計數
1 主題內容與適用范圍
本文規定了食品和飲料霉菌計數的檢驗方法。
本文適用于航空食品和飲料中霉菌計數的檢驗。
2 設備和材料
溫箱（25～28℃）、振蕩器、天平、玻塞三角瓶（500mL）、平皿（直徑9cm）、吸管（1mL及10mL）、酒精燈等。
3 培養基和試劑
高鹽察氏培養基、**蒸餾水、乙醇
4 操作步驟
4.1 無菌操作稱取檢樣25g(或25mL)，放人含有225mL**水的玻塞三角瓶中，振搖30min，即為1：10稀釋液。
4.2 用**吸管吸取1∶10稀釋液10mL，注入試管中，另用帶橡皮**的1mL**吸管反復吹吸50次，使霉菌孢子充分散開。
4.3 取1mL1∶10稀釋液注入含有9mL**水的試管中，另換一支1mL**吸管吹吸5次，此液為1∶100稀釋液。
4.4 按上述操作順序做10倍遞增稀釋液，每稀釋一次，換用一支1mL**吸管，根據對樣品污染情況的估計，選擇3個合適的稀釋度，分別在做10倍稀釋的同時，吸取1mL稀釋液于**平皿中，每個稀釋度做2個平皿，然后將涼至45℃左右的培養基注入平皿中，待瓊脂凝固后，倒置于25～28℃溫箱中，3d后開始觀察，共培養觀察5d。
4.5 計算方法：通常選擇菌落數在10～150之間的平皿進行計數，同稀釋度的2個平皿的菌落平均數乘以稀釋倍數，即為每克(或毫升)檢樣中所含霉菌數。
4.6 報告：每克(或毫升)食品所含霉菌以個/g(個/mL)表示。
注：本文參照GB/T4789.15-2003《食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數》
（九）革蘭氏染色
1 原理
革蘭氏染色法是細菌學中重要的鑒別染色法，通過此法染色，可將細菌鑒別為革蘭氏陽性菌和陰性菌兩大類。其過程是：草酸銨結晶紫初染→路哥爾氏碘液媒染→95%乙醇脫色→蕃紅花紅復染。若細胞能保持結晶紫與碘所形成的復合物而不被乙醇脫色，則細菌呈紫色，稱革蘭氏陽性菌，若被乙醇脫色而被蕃紅復染成紅色，則稱革蘭氏陰性菌，
2 藥品與材料
革蘭氏染色液（草酸銨結晶紫液＋路哥爾氏碘液＋95%乙醇＋蕃紅花紅）、蒸餾水、菌落培養物（培養18~24小時）、二甲苯、香柏油
3 器具及其它
載玻片、蓋玻片、酒精燈、廢液缸、洗瓶、吸水紙、接種環、顯微鏡、鑷子
4 操作程序
涂片→干燥→固定→草酸銨結晶紫初染→水洗→碘液媒染→95%酒精脫色20~30秒→水洗→蕃紅花紅液復染→水洗干燥→鏡檢
4.1 涂片：先滴一小滴蒸餾水于載玻片中央，然后用接種環取少量菌體輕輕混入水中，涂成一薄層并使細胞均勻分散。
4.2 干燥：在空氣中令其自然干燥或在酒精燈火焰上端高處微微加溫但勿靠近火焰。
4.3 固定：把涂有細菌的面朝上，在酒精燈火焰上通過三次，目的是殺死菌體細胞以及改變對染色劑的通透性，同時使涂片的菌體緊貼載玻片而不易被水沖洗脫落。
4.4 初染：用草酸銨結晶紫液初染1分鐘，水洗、吸干。
4.5 媒染：加一滴路哥爾氏碘液媒染1分鐘、水洗。（此時結晶紫與碘液成復合物）
4.6 脫色：斜置載玻片，用95%酒精沖洗約20~30秒種，立即水洗，吸干。
4.7 復染：用蕃紅花紅液復染1~2分種，水洗晾干或用吸水紙吸干。
4.8 鏡檢：在顯微鏡油浸鏡下檢查革蘭氏陽性菌和陰性菌染色的差異，并觀察菌體形態。
5 革蘭氏染色成敗的控制點
5.1 涂片厚度：涂片過厚，細胞重疊，無法較好地觀察單個細菌細胞形態，涂片過薄，細胞數量少，不利于觀察；
5.2 染色時間。染色時間過長,結晶紫與細胞結合，脫色不易，染色不夠，結晶紫尚未與細胞結合。染色控制不好，易引起誤判；
5.3 乙醇脫色的程度。如脫色過度，則陽性菌被誤染為陰性菌；若脫色不夠，則陰性菌被誤染為陽性菌。
（十）空氣中微生物的檢驗
1 目的
了解空氣中微生物的狀況，掌握空氣中微生物的檢驗方法，分析引起食品中微生物的來源因素，及時控制餐食衛生質量。
2 原理
根據空氣中微生物一般吸附在塵埃中，由于地心引力塵埃下沉到地面或物體表面原理制定的。
3 器材
培養皿、生化培養箱、營養瓊脂
4 方法（沉降法）
4.1 以無菌操作將已融化并冷卻至50℃的營養瓊脂倒入培養皿中，放置凝固。
4.2 在不同地點將培養皿分別打開，在空氣中暴露15分鐘，立即將培養皿蓋好，作上記號，并作一空白對照。
4.3 將培養皿放置37℃恒溫培養48小時，取出觀察其結果并計算出菌落數。
4.4 計算公式：每立方米空氣中細菌數＝50000N/(A×t)
N：為培養皿經培養后的菌落數
A：為所用平皿面積(cm2)，平皿直徑(ø)9cm
t：為平皿暴露于空氣中的時間(t=15分鐘)
（這個公式根據：根據15分鐘內在100 cm2面積上降落的細菌數約等于10升空氣中的含菌數而估計的。）
注：本文參照GB15979-2002《一次性使用衛生用品衛生標準》附錄E
（十一） 水中微生物的檢驗
1 基本原理
細菌總數是指水樣在一定條件下培養后所得1ml水樣所含菌落的總數。
總大腸菌群系指一群在37℃培養24h能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。該菌群主要來源于人畜糞便，具有指示菌的一般特征，故以此作為糞便污染指標評價飲水的衛生質量。水中總大腸菌群數系以100ml水樣中污染的總大腸菌群*可能數（MPN）表示。
按國家飲用水衛生標準規定，1毫升自來水中雜菌數不得超過100個，大腸菌群數1000毫升水中不得超過3個才算合格。
2 材料
營養瓊脂、乳糖膽鹽發酵培養基、酒精、棉簽、培養皿、無菌廣口瓶
3 方法
3.1 采樣（自來水）：先將水龍頭打開，放水1~2分鐘后，關閉水龍頭。用酒精棉球灼燒龍頭三分鐘**，再開放水龍頭使水流5分鐘，用無菌瓶收集水樣。
3.2 細菌總數檢查：
3.2.1 用**吸管吸取1ml水樣，注入**培養皿中，共做2個。
3.2.2 分別傾注約15ml已熔化冷卻至45℃左右的營養瓊脂，混勻后置37℃培養24小時進行菌落計數，同時應作一空白對照。兩個培養皿的平均菌落數即為水樣1ml中的細菌總數。
3.3 大腸菌群數檢查：
乳糖發酵試驗→分離培養→證實試驗→報告
3.3.1 乳糖發酵試驗：
自來水的接種方法：在2個裝有50ml三倍料乳糖膽鹽發酵液的三角瓶中，各加入100ml水樣；在10支裝有5ml同樣發酵的試管中，各加入10ml水樣，混勻。將上述各發酵管（瓶）置36±1℃溫箱內，培養24±2小時，觀察結果。如所有發酵管都不產氣，則可報告為大腸菌群陰性；如有產氣者，則按下列程序進行。
3.3.2 分離培養：將產氣的發酵管用接種環分別以劃線法轉接于伊紅美蘭瓊脂平板上，置36±1℃溫箱內，培養18~24小時，取出觀察菌落形態。
3.3.3 證實試驗：在每個平板上，挑取可疑菌落(紫黑色或淡紫紅色，有或略有或沒有金屬光澤的菌落)1~2個進行革蘭氏染色，同時接種乳糖發酵管，置36±1℃培養24±2小時進行復發酵試驗，觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的芽孢桿菌即可報告為大腸菌群陽性。
4 報告
每毫升自來水所含菌落數以個/mL表示；根據證實為大腸菌群陽性的管數，查大腸菌群檢索表，報告每升水樣的大腸菌群的*可能數。
注：本文參照GB5750-85《生活飲用水標準檢驗方法》
（十二）食品接觸面的微生物檢驗
1 原理
食品接觸面分為人員手、設備、器具等食品直接接觸，其表面存在有微生物，為更好控制微生物生長繁殖，以大腸菌群為主要檢測指標，檢測結果應基本呈陰性（其中人員手需做菌落總數檢測）。 2 檢驗材料
乳糖膽鹽發酵培養基、EMB、乳糖復發酵培養基、大腸菌群檢測紙片、無菌棉球、無菌水、酒精棉球、酒精燈、鑷子 3 檢驗方法
3.1 人員手檢驗（發酵法）
3.1.1 樣品采集
被檢人雙手五指并攏，用一浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來回涂擦10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10ml**生理鹽水的采樣管內。
3.1.2 細菌菌落總數的檢測
將已采集的樣品在6h內送實驗室，每支采樣管充分混勻后取1ml樣液，放入**平皿內，傾注營養瓊脂培養基，每個樣品平行接種兩塊平皿，置36±1℃培養48小時，計數平板上細菌菌落數。
Y＝A*10（Y為工人手表面細菌菌落總數，cfu/只手；A為平板上平均細菌菌落數）
3.1.3 大腸菌群的檢測
每支采樣管充分混勻后取1ml樣液，分別放入10ml乳糖膽鹽發酵管中，每個樣品平行接種3管，置36±1℃培養24小時。如所有發酵管都不產氣，則可報告為大腸菌群陰性；如有產氣者，則按下列程序進行。
3.1.4 分離培養：將產氣的發酵管用接種環分別以劃線法轉接于伊紅美蘭瓊脂平板上，置36±1℃溫箱內，培養18~24小時，取出觀察菌落形態。
3.1.5 證實試驗：在每個平板上，挑取可疑菌落(紫黑色或淡紫紅色，有或略有或沒有金屬光澤的菌落)1~2個進行革蘭氏染色，同時接種乳糖發酵管，置36±1℃培養24±2小時進行復發酵試驗，觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的芽孢桿菌即可報告為大腸菌群陽性。
3.2 設備、器具等的檢驗（紙片法）
3.2.1 將面積為25cm2的大腸菌群檢測紙片用無菌水浸濕后立即貼于被檢物表面，每份檢樣貼2張，30s后取下，置于無菌塑料袋中。
3.2.2 將已采樣的紙片置37℃培養16－18小時，觀察紙片顏色變化情況。
3.2.3 若紙片保持藍紫色不變為大腸菌群陰性，紙片變黃并在黃色背景上呈現紅色斑點或片狀紅暈為陽性。
4 報告
人員手菌落總數為cfu/只手，大腸菌群為未檢出或檢出；設備、器具等大腸菌群為未檢出或檢出。
注：本文參照GB15979-2002《一次性使用衛生用品衛生標準》附錄E
GB14934—94《食(飲)具**衛生標準》
（十三）蔬菜農殘的快速檢測
1 原理
農殘速測卡是用對農藥高度敏感的膽堿酯酶和顯色劑做成的酶試紙，可以快速檢測蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯這兩類用量較大、毒性較高的殺蟲劑的殘留情況，選用的酶對甲胺磷敏感，抗干擾性強，操作簡便。該方法已經國家標準委員會通過，定為國家標準方法GB/T5009.199-2003。
農殘速測卡對幾種常用農藥的*低檢測限（單位：mg/kg）如下：
甲胺磷1.7 馬拉硫磷2.0 水胺硫磷3.1 對硫磷1.7
久拉磷2.5 乙酰甲胺磷3.5 敵敵畏0.3 樂果1.3
敵百蟲0.3 呋喃丹0.5 西維園2.5 好年冬1.0
2 檢驗材料
農殘速測卡
3 使用方法
3.1 整體測定法
3.1.1 選取有代表性的蔬菜樣品，擦去表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，取5g放入帶蓋瓶中，加入10ml純凈水或緩沖溶液，振搖50次，靜置2min以上。
3.1.2 取一片速測卡，用白色藥片沾取提取液，放置10min以上進行預反應，有條件時在37℃恒溫裝置中放置10min。預反應后的藥片表面必須保持濕潤。
3.1.3 將速測卡對折，用手捏3min或用恒溫裝置恒溫3min，使紅色藥片與白色藥片疊合發生反應。
3.1.4 每批測定應設一個純凈水或緩沖液的空白對照卡。
3.2 表面測定法（粗篩法）
3.2.1 擦去蔬菜表面泥土，滴2-3滴洗脫液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液處輕輕摩擦。
3.2.2 取一片速測卡，將蔬菜上的液滴滴在白色藥片上。
3.2.3 放置10min以上進行預反應，有條件時在37℃恒溫裝置中放置10min。預反應后的藥片表面必須保持濕潤。
3.2.4 將速測卡對折，用手捏3min或用恒溫裝置恒溫3min，使紅色藥片與白色藥片疊合發生反應。
3.2.5 每批測定應設一個純凈水或緩沖液的空白對照卡。
4 結果判定
與空白對照卡比較，白色藥片不變色或略有淺藍色均為陽性結果，不變藍為強陽性結果，說明農藥殘留量較高，顯淺藍色為弱陽性結果，說明農藥殘留量相對較低。白色藥片變為天藍色或與空白對照卡相同，為陰性結果。對陽性結果的樣品，可用其它分析方法進一步確定具體農藥品種和含量。
5 附加說明
5.1 蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、皎白、蘑菇及番茄汁液中，含有對酶有影響的植物次生物質，容易產生假陽性。處理這類樣品時，可采取整株（體）蔬菜浸提或采用表面測定法。對一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株（體）蔬菜浸提的方法，減少色素的干擾。
5.2 當溫度條件低于37℃，酶反應的速度隨之放慢，藥片加液后放置反應的時間應相對延長，延長時間的確定，應以空白對照卡用（體溫）手指捏3分鐘時可以變藍，即可往下操作。注意樣品放置的時間應與空白對照卡放置的時間一致才有可比性。空白對照卡不變色的原因：一是藥片表面緩沖溶液加的少、預反應后的藥片表面不夠濕潤，二是溫度太低。
5.3 速測卡對農藥非常敏感，測定時如果附近噴灑農藥或使用衛生殺蟲劑，以及操作者和器皿沾有微量農藥，都會造成對照和測定藥片不變藍。
5.4 紅色藥片與白色藥片疊合反應的時間以3min為準，3min后藍色會逐漸加深，24h后顏色會逐漸退去。